Objetivou-se analisar a herança e identificar marcadores microssatélites ligados ao gene de resistência da 'TMG 803' à Phakopsora pachyrhizi. Foi realizada hibridação entre as cultivares TMG 803 e BRS Valiosa RR para obtenção da progênie F1 e população F2. Os genitores 'TMG 803' e 'BRS Valiosa RR' comportaram-se, respectivamente, como resistentes e suscetíveis e entre as 116 plantas F2, 93 comportaram-se como resistentes e 23 como suscetíveis à P. pachyrhizi, submetidas à infecção natural, em condições de campo. Verificou-se que a resistência da cultivar TMG 803 é governada por um gene com dominância completa, mapeado como o loco de resistência Rpp4, do grupo de ligação G. Dentre os 16 marcadores microssatélites testados, um marcador, sc21_3420, encontrou-se completamente ligado ao gene de resistência (distância de 0,0cM) estando a forma alélica favorável presente na cultivar TMG 803, podendo, portanto, ser útil na seleção assistida em populações segregantes.

This study analyzed the inheritance and identified microsatellite markers linked to the resistance gene to Phakopsora pachyrhizi in soybean cultivar TMG 803. Hybridization between the cultivars TMG 803 and BRS Valiosa RR was performed to obtain F1 progenies and the F2 population. The response of the parents 'TMG 803' and 'BRS Valiosa RR' to P. pachyrhizi was, respectively, resistant and susceptible, and among the 116 F2 plants,93 were resistant and 23 susceptible, under natural infection and field conditions. It was found that the resistance of cultivar TMG 803 is controlled by one gene with complete dominance, mapped as resistance locus Rpp4 of linkage group G. Of the 16 tested, one microsatellite marker, sc21_3420, was completely linked to the resistance gene (distance 0.0cM) and the favorable allelic form was present in cultivar TMG 803, which may therefore be useful in assisted selection in segregating populations.

O presente trabalho objetivou caracterizar parcialmente os genes envolvidos com a tolerância à dessecação do eixo embrionário de sementes de Melanoxylon brauna submetidas ou não à secagem rápida. As sementes foram submetidas à secagem rápida em estufa nas temperaturas de 40 ºC, 50 ºC, 60 ºC, 70 ºC e 80 ºC, nos tempos de 24, 48 e 72 h e, em seguida, submetidas ao teste de germinação e determinação do grau de umidade. Foram utilizados primers degenerados para 19 genes. Os produtos de PCR obtidos foram purificados, clonados no vetor pGEM-T Easy e sequenciados. As sementes apresentaram redução gradativa na porcentagem de germinação com o aumento da temperatura e tempo de secagem. Foram obtidas as sequências dos fragmentos clonados referentes aos genes CAT1, SPS1, ABI5, Transk e PM25. A comparação das sequências obtidas com sequências depositadas em bancos de dados revelou similaridade com os genes CAT1, SPS1, Transk e PM25 de outras espécies. As sequências de nucleotídeos obtidas dos respectivos genes servirão para a confecção de oligonucleotídeos específicos para posteriores estudos de expressão gênica durante a germinação de sementes de M. brauna submetidas à secagem, visando entender as causas da perda de qualidade fisiológica dessas sementes.

The objective of this study was to partially characterize some genes involved in the desiccation tolerance of the embryonic axis of Melanoxylon brauna seeds subjected, or not, to oven fast-drying. Seeds were initially dried rapidly in an oven at 40 ºC, 50 ºC, 60 ºC, 70 ºC, and 80 °C, for 24, 48 and 72 h and then subjected to germination tests and moisture content determination. Degenerate primers were designed for 19 genes. The CDNA was used as a template for PCR amplifications using the degenerate primers, and the PCR products obtained were purified, cloned and sequenced. The seeds showed a gradual reduction in percent germination with increasing temperature and drying time. Nucleotide sequences of the cloned fragments related to genes CAT1, SPS1, Abi5, Transk and PM25 were obtained. The similarity analysis with the sequences deposited in databases revealed similarities with genes CAT1, SPS1, Transk and PM25 from other plant species. The nucleotide sequences obtained from the respective genes will be used for designing specific primers for gene expression analyses during seed germination in order to understand the causes for loss of physiological quality of Melanoxylon brauna seeds.

Ensaios foram conduzidos para verificar a presença, o número de cópias e de sítios de integração de pAN7-1 no genoma de mutantes de M. grisea I-22 com patogenicidade alterada em arroz. Foram analisados T41, T93, T251 (gerados por mutagênese REMI) e T108 (oriundo de mutagênese convencional), os quais exibiram diferentes fenótipos mutantes. O DNA total desses mutantes foi submetido à reação em cadeia de polimerase (PCR) e às análises de hibridização com o vetor (Southern blot). A presença de pAN7-1 no genoma de todos os mutantes foi confirmada por PCR. Segundo as análises de Southern blot, T41 exibiu duas integrações do vetor, ambas na forma de cópia única. No genoma de T93 também foram detectados dois sítios de inserção de pAN7-1, um dos quais envolvendo múltiplas cópias do vetor. Os resultados indicaram a presença de apenas uma cópia do vetor em um único sítio nos genomas de T108 e T251. O padrão de integração em T251 foi o único a sugerir a ocorrência de evento REMI. As diferenças quanto ao tamanho dos fragmentos com homologia a pAN7-1 refletiram a possível aleatoriedade dos eventos de integração no genoma de M. grisea. Os resultados evidenciaram o potencial de REMI para a mutagênese insercional de M. grisea, quando conduzida com pAN7-1 e HindIII

Experiments were conducted to investigate the presence, number of copies and integration site of pAN7-1 in the genome of mutants of Magnaporthe grisea impaired in pathogenicity to rice. The mutants T41, T93, T251 (obtained by REMI) and T108 (obtained by conventional mutagenesis) exhibiting different alterations in pathogenicity were analyzed. Polymerase chain reaction (PCR) and Southern blot analyses were conducted with total DNA of mutants. The presence of pAN7-1 in genome of mutants was confirmed by PCR. Based in Southern blot analyses, two single-copy integration of vector were detected in T41. Two insertion sites of pAN7-1 were detected in the genome of T93, including an event of tandem integration. The results indicated the presence of a single-copy vector in single location in T108 and T251 genomes. Only T251 showed integration pattern of pAN7-1 suggesting the occurrence of REMI event. The difference in size of hybridizing band indicated the possible randomness of integration events in M. grisea genome. The potential of REMI to mutagenesis in M. grisea, using pAN7-1 and HindIII, was evidenced.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade genética em frutos de Capsicum com relação ao acúmulo de sólidos solúveis totais, degradação de clorofila, síntese de carotenóides e tempo necessário para o completo amadurecimento de frutos, em resposta ao tratamento com ethephon. O tratamento com ethephon provocou alteração do conteúdo de sólidos solúveis totais em frutos dos acessos BGH 4366 (C. baccatum) e BGH 4708 (C. frutescens), enquanto os demais acessos não foram responsivos ao tratamento. O amadurecimento dos frutos foi caracterizado por decréscimo no conteúdo de clorofila e conteúdo de carotenóides, contudo, não foi detectada variabilidade genética entre os acessos para a degradação da clorofila e para a síntese de carotenóides, quando tratados com ethephon. O uso de ethephon acelerou o amadurecimento nos acessos BGH 4179 (C. frutescens), BGH 6029 (C. baccatum) e Ca 6 (C. annuum).

The goal of the present work was evaluate the genetic variability regarding the accumulation of total soluble solids, degradation of chlorophyll, synthesis of carotenoids and number of days to full ripening of Capsicum fruits treated with ethephon. The treatment with ethephon altered the content of soluble solids in the fruits of accessions BGH 4366 (C. baccatum) and BGH 4708 (C. frutescens), while the remaining accessions did not show any changes when treated with ethephon. The ripening was characterized by the degradation of chlorophyll and increase in the synthesis of carotenoids in all fruit, but there was no variability among the accessions when treated with ethephon. The ethephon was efficient in inducing the ripening of BGH 4179 (C. frutescens), BGH 6029 (C. baccatum) and Ca 6 (C. annuum) accessions.

Tumores - sintomas hiperplásicos em plantas - incitados por espécies de Agrobacterium sp. sempre exerceram fascínio sobre fitopatologistas desde o início do Século XX, quando Erwin Smith e colaboradores demonstraram serem eles de etiologia bacteriana. No início, imaginava-se que os tumores eram decorrentes de alterações hormonais na planta provocadas pela bactéria. Contudo, até recentemente, a microbiologia e a biologia molecular não eram suficientemente avançadas para que os cientistas pudessem compreender e deduzir a forma através da qual o patógeno incitava os tumores. Demorou quase um século para que se deslindassem os complexos mecanismos bioquímicos, genéticos e fisiológicos através dos quais o patógeno transforma a planta, inserindo no genoma desta uma região de seu megaplasmídeo de modo a criar para si mesmo um nicho ecológico específico. Neste trabalho é apresentada uma súmula histórica da evolução do conhecimento a respeito, das características genômicas do plasmídeo Ti, dos eventos e requerimentos atinentes ao processo infectivo bem como é discutida a dinâmica da transformação da planta pelo patógeno.

Tumors - the plant hyperplasia symptoms- - induced by species of Agrobacterium sp. have deeply impressed plant pathologists since early 20th Century when Erwin Smith and his co-workers demonstrated that such tumors had a bacterial etiology. Nevertheless, until recently the state of art of Microbiology and Molecular Biology was not developed enough for scientists to realize and to elucidate the complexes biochemical, genetic and physiologic mechanisms by which the pathogen transforms the plant by inserting a region of its own plasmid into the genome of the latter, creating an specific ecological niche for itself. In this paper its is showed a historical brief on the evolution of knowledge about the genomic characteristics of the Ti Plasmid, events and requirements needed for infection to take place as well as it is discussed the transformation dynamics of the host by the pathogen.

Protoplastos são ferramentas biológicas importantes para pesquisas em fungos filamentosos, sendo empregados intensamente em transformação genética. O isolamento de protoplastos de Magnaporthe grisea foi facilitado com Novozym 234, contudo, este complexo enzimático encontra-se indisponível no mercado. Assim, objetivou-se comparar a eficiência de enzimas líticas disponíveis comercialmente na obtenção de protoplastos de M. grisea. Paralelamente, analisaram-se estabilizadores osmóticos, tempos de digestão e freqüência de regeneração. Maior produção de protoplastos foi obtida com o uso simultâneo de Lysing Enzymes e Cellulase Onozuka R-10. O uso de 10 ou 15 mg de cada complexo enzimático, em 3 mL de estabilizador osmótico, resultou em maior liberação de protoplastos. O melhor estabilizador osmótico foi MgSO4 1,2 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8, seguido por MgSO4 0,8 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8. O isolamento de protoplastos foi monitorado a cada 60 minutos, atingindo o máximo após incubação por 3 a 6 horas. No entanto, maior freqüência de regeneração (19,4%) foi registrada para protoplastos obtidos após 3 horas de hidrólise enzimática.

Protoplasts are important biological tools in filamentous fungi research. Fungal protoplasts have been extensively used in experiments with genetic transformation. Protoplastization of Magnaporthe grisea was accomplished with Novozym 234, however, this enzymatic complex is no commercially available for purchase. Thus, the efficiency of several other commercial enzymes in M. grisea protoplasts preparation was investigated. At the same time, osmotic buffer, digestion time and regeneration rate were also analyzed. The highest protoplasts production was obtained with Lysing Enzymes plus Cellulase Onozuka R-10. The use of 10 or 15 mg of each enzymatic complex in 3 mL of osmotic buffer was most effective for the protoplasts yields. The best osmotic buffer was MgSO4 1.2 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8, followed by MgSO4 0.8 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8. The M. grisea protoplasts yield, evaluated at each 60 min, increased with 3 to 6 hours of incubation. However, the highest regeneration frequency (19.4%) was recorded for protoplasts obtained with 3 hours of enzymatic hydrolyse.

Visando adequar um sistema de transformação genética mediada por Agrobacterium tumefaciens, para as cultivares de tomateiro industrial ‘IPA-5’ e ‘IPA-6’, foram avaliados alguns fatores que afetam a eficiência de transformação, incluindo o genótipo, o vetor, a temperatura de co-cultivo e antibióticos. O genótipo foi um dos fatores mais importantes na eficiência de transformação. A tolerância natural à canamicina de explantes cotiledonares das cultivares de tomateiro ‘IPA-5’ e ‘IPA-6’ foi avaliada quanto à capacidade organogênica. Verificou-se que a concentração mínima de canamicina a ser utilizada na fase de seleção dos transformantes no meio de indução de brotos foi de 75 mgL-1 para ambas as cultivares, enquanto que no meio de enraizamento, foi de 75 mgL-1 de canamicina para ‘IPA-6’, e de 100 mgL-1 para ‘IPA-5’. O protocolo permitiu a transformação genética mediada por A. tumefaciens aplicável às cultivares nacionais de tomateiros ‘IPA-5’ e ‘IPA-6’, com uma eficiência média de transformação de 5%.

The objective of this study was to adapt an A. tumefaciens-mediated genetic transformation system to the processing of the Brazilian tomato cultivars ‘IPA-5’ and ‘IPA-6’. Factors such as antibiotics, genotype, vector and temperature of co-cultivation, which affect transformation efficiency, were examined. The Genotype was the most important factor to influence the cultivars transformation efficiencies. Based on the natural tolerance to kanamycin of both cultivars a concentration of 75mg L-1 was used during regeneration phase. Therefore, during 'IPA-6' and 'IPA-5' rooting phase was used 75 and 100mg L-1 kanamycin, respectively. Based on the results of these experiments a protocol for A. tumefaciens-mediated genetic transformation of the ‘IPA-5’ and ‘IPA-6’ Brazilian tomato processing cultivars was developed with an average of 5% transformation efficiency.